blast里选择合适的引物

7 怎样看某对引物能不能检测出其它相似基因：在两条引物中，一条引物突变碱基数大于等于3。

3 Tm值要在60℃左右， 6 越靠前越好， 首先一定要确保“Exon junction span”选项设置为“primer must span an exon-exon junction”，针对其他基因，不能差太多，且正反引物的值要接近，。

能P出相应长度的条带就是有效的引物，不能差太远， 2 产物长度一般设置为90-180为较好。

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就不会PCR出其他基因，一般在45%-55%之间较好。

这是为了排除DNA污染， 4 GC含量也要接近， 5 自我配对不能太高， 8 最后进行PCR验证。

一般在前三对里选，另一条引物突变碱基数大于等于2。